インドール類、それらの誘導体、それらの類似体及びそれらの使用

专利摘要:
インドールの誘導体化合物及び類似体化合物及びそれらを含む医薬組成物が提供される。これらの化合物を用いて、増殖性疾患に関連する細胞におけるチューブリンの重合を阻害する方法、又は癌を治療する方法も提供される。Ａ
公开号:JP2011505368A
申请号:JP2010536154
申请日:2008-11-26
公开日:2011-02-24
发明作者:アン，ソンジュ；ダルトン，ジェームズ；デューク，チャールズ；ファン，ドン・ジン；ミラー，デューン；ヤン，ジュン
申请人:ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイション；ユニバーシティ オブ テネシー リサーチ ファウンデーション；
IPC主号:C07D209-12

专利说明:

[0001] 本発明は部分的には、国立衛生研究所によって授与された助成金番号ＤＫ−０６５２２７−０２を介した米国政府の支援によって行われた。米国政府は、本発明における一定の権利を持つことができる。]
背景技術

[0002] チューブリンは、重要な微小管タンパク質であり、癌の化学療法のための有効な分子標的である。タキサン類及びビンカアルカロイド類を始めとする微小管を標的とする薬剤は、微小管の紡錘体が介在する染色体分離を妨害し、有糸分裂における腫瘍細胞の分裂を停止させ、続いてアポトーシスを誘導する。種々の癌、たとえば、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、肺癌、白血病及びリンパ腫におけるこれら薬剤の効能、薬効及び幅広い臨床での使用によって、癌の増殖におけるチューブリン及びその役割の重要性に対する証が立てられている。残念ながら、これらの薬剤は、薬剤耐性に共通するメカニズム、すなわち、Ｐ−糖タンパク質が介在する、又はＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポータタンパク質が介在する薬剤流出のメカニズムも共有しており、そのことによって多くの腫瘍におけるそれらの有効性が限定されている。]
[0003] 食物供給源及び非食物供給源の植物に由来する天然に存在する化合物が調べられており、それらは、種々の癌に対して抗癌効果を発揮することが多い。さらに有効な抗癌剤を見つけ出すためにこれら植物性化合物の誘導体や類似体が常に単離または合成されている。最近、乳癌、子宮頸癌、前立腺癌及び結腸癌に対して見込みのある抗癌治療剤として、ブロッコリー、芽キャベツ又はキャベツのようなアブラナ科野菜に由来する植物栄養素である化合物、インドール−３−カルビノールが研究されている。]
[0004] そのほかのインドール誘導体が合成されている。米国特許第６，６３８，９６４号は、悪性腫瘍及び自己免疫疾患を治療するのに有用な置換されたスルホンアミドによって誘導体化されたインドールを開示している。米国特許第６，８１２，２４３号は、細胞増殖性疾患を治療するためのチロシンキナーゼ阻害剤として有用な、高度に置換されたビスインドール類を開示している。]
[0005] しかしながら、抗癌剤として使用される天然に存在するインドール化合物又は合成のインドール化合物は、投与量の多さ、代謝分解よる抗癌活性の喪失、又は毒性に起因する欠点を有する可能性がある。理に適った用量で容易に投与することができ、細胞増殖性疾患の発症に関わる活性を阻害する能力を保持し、改善された安定性、上昇した臨床的有効性、一貫した結果、及び最少限の毒性と副作用を有する有効なインド−ル誘導体を開発する試みが、継続して進行中である。従って、従来技術は、治療法として有用なインドールの誘導体及び類似体を欠くという点で依然として不十分である。]
[0006] 本発明の実施態様によれば、化合物が提供される。これらの化合物は、]
[0007] ]
[0008] の構造式を有し、式中、
Ｒ１は、Ｈ、ハライド、ＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、−ＯＣＨ３又はＣＮアルキル、アルケニル、Ｏ−アルキル及びＯ−アリールであり、ｎは０、１、２、３、又は４であり；
Ｒ２は、Ｈ又は−ＳＯ２Ｐｈであり；
Ｒ３は、Ｒ４によってＣ３又はＣ５にて置換されたフェニル；Ｒ８Ｒ９；Ｒ１２Ｒ１３；２−、３−又は６−インドリルによってＣ１、Ｃ２又はＣ３にて置換された２−、３−又は６−インドリル（インドリル部分のいずれかは独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換される）；又は、Ｃ５、Ｃ６又はＣ７にて２−、３−又は６−インドリルによって置換されたナフチル又は置換されないナフチル（インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換される）であり、
Ｒ４は、Ｒ５、Ｃ１〜３アルキレン−Ｒ５、Ｃ（Ｏ）Ｒ６、ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｒ７）−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７−Ｒ６、−Ｏ−Ｃ（Ｒ７）−Ｒ６、Ｒ８、Ｒ７Ｒ８−（２−、３−若しくは６−インドリル）、Ｒ８−（２−、３−若しくは６−インドリル）（インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換され）、Ｒ８Ｒ９又はＲ１２Ｒ１３であり；
Ｒ５は、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１−３アルキル、Ｎ＝Ｎ＝Ｎ、ＣＮ又はＯＲ６であり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−３アルキル、又はＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって独立して置換された５員環若しくは６員環であり；
Ｒ７は、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり；
Ｒ８は、−ＣＨ２、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｃ＝ＣＨ２、Ｃ＝ＮＯＨ、Ｃ＝Ｎ（ＮＨ２）であり；
Ｒ９は、Ｃ３にてＲ１０によって、及びＣ４とＣ５にてＲ１１によって独立して置換されたフェニル、Ｃ４にて−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３によって置換されたチアゾリル、又は、Ｃ５、Ｃ６若しくはＣ７にて２−、３−若しくは６−インドリルによって置換されたナフチル又は置換されないナフチルであり、インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換され；
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、−ＯＣＨ３、フェニル、ナフチルであり、又はＣ４のＲ１１とジオキソリル環を形成し；
Ｒ１１は、Ｈ、ＯＨ又は−ＯＣＨ３であり；
Ｒ１２は、ピロリル、フラニル、チエニル又はシクロペンタジエニルであり；
Ｒ１３は、それぞれ独立してＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって置換された−Ｃ（Ｏ）−２−、３−若しくは６−インドリル、−Ｃ（Ｏ）−イミダゾール、−Ｃ（Ｏ）−チアゾール、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−イソオキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−ベンズオキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−ピロール、−Ｃ（Ｏ）−フラン、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾリン、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾリジン、−Ｃ（Ｏ）−オキサジアゾール、−Ｃ（Ｏ）−ナフチル又は−Ｃ（Ｏ）−フェニルである。]
[0009] これらの化合物はまた、薬理学上許容可能な塩又は水和物の形態であってもよい。これらの化合物は、薬上許容可能なキャリアと共に医薬組成物として調剤されてもよい。
その上さらなる実施態様によれば、対象者における細胞増殖性疾患に関連する細胞におけるチューブリンの重合を阻害する方法も提供される。これらの方法は、細胞増殖性疾患に関連する細胞を、薬理学上有効量の、本明細書で記載される化合物又はその医薬組成物と接触させることを含むことができる。]
[0010] その上さらなる実施態様では、対象者の癌を治療する方法が提供される。これらの方法は、該化合物が癌の増大を抑制する対象者に対して、薬理学上有効量の、本明細書で記載される化合物又はその医薬組成物を投与し、それによって癌を治療することを含むことができる。]
[0011] 本発明の実施態様の以下の詳細な説明は、類似の構造が類似の参照番号で示される以下の図面を合わせて読まれた場合、最もよく理解することができる。]
図面の簡単な説明

[0012] 図１Ａは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。化合物１０、１１及び１３についての合成スキームを図１Ａに示す。
図１Ｂは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。化合物１４〜３１の構造を図１Ｂに示す。
図１Ｃは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｃに示す。
図１Ｄは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｄに示す。
図１Ｅは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｅに示す。
図１Ｆは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｆに示す。
図１Ｇは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｇに示す。
図１Ｈは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｈに示す。
図１Ｉは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｉに示す。
図１Ｊは、本発明に係る化合物の代表的な合成スキーム及び代表的な構造を示す図である。構造１４〜３１の少なくとも１つの化合物を調製するための合成スキームを図１Ｊに示す。
図２Ａは、化合物１３が、ＬｎＣａｐ細胞及びＰＣ−３細胞においてアポトーシスを誘導する（図２Ａ）ことを示す図である。
図２Ｂは、化合物１３が、ＬｎＣａｐ細胞及びＰＣ−３細胞において抗アポトーシスタンパク質を減らす（図２Ｂ）ことを示す図である。
図２Ｃは、化合物１３が、ＬｎＣａｐ細胞及びＰＣ−３細胞においてＤＮＡの断片化を誘導する（図２Ｃ）ことを示す図である。
図３Ａ〜３Ｂは、化合物１３が、ＬＮＣａｐ細胞においてＧ２／Ｍ期での停止を誘導し（図３Ａ）、試験管内でのチューブリンタンパク質の重合を阻害する（図３Ｂ）ことを示す図である。
図３Ａ〜３Ｂは、化合物１３が、ＬＮＣａｐ細胞においてＧ２／Ｍ期での停止を誘導し（図３Ａ）、試験管内でのチューブリンタンパク質の重合を阻害する（図３Ｂ）ことを示す図である。
図４は、ＩＣＲマウスの体重に対する５０、１００及び２００ｍｇ／ｋｇの化合物１３の影響を示す図である。
図５は、マウスにおける化合物１３の平均血漿濃度−時間の分析結果を示す図である。
図６は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＰＣ−３異種移植片に対する化合物１３の抗腫瘍活性を示す図である。] 図１Ａ 図１Ｂ 図１Ｃ 図１Ｄ 図１Ｅ 図１Ｆ 図１Ｇ 図１Ｈ 図１Ｉ 図１Ｊ
[0013] 今や本発明の特定の実施態様を時折参照して本発明を説明する。しかしながら、本発明は、異なった形態で具現化されてもよく、本明細書で言及される実施態様に限定されると解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施態様は、本開示が詳細で且つ完全であり、本発明の範囲を当業者に完全に伝えるように提供される。]
[0014] 特に定義されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語のすべては、本発明が属する当業者によって共通して理解されるものと同様の意味を有する。本明細書における本発明の記載にて使用される専門用語は、特定の実施態様のみを説明するためのものであり、本発明を限定するように意図したものではない。本発明の記載及び添付の特許請求の範囲で使用されるとき、文脈が明瞭に別の意味を示さない限り、単数の形態、「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、複数の形態を同様に含むことを意図する。本明細書で言及される出版物、特許出願、特許及びそのほかの参考文献はすべてその全体を参照によって本明細書に組み入れる。]
[0015] 特に示されない限り、明細書及び特許請求の範囲で使用されるような成分の量、分子量のような特性、反応条件などを表現する数はすべて、用語「約」によってあらゆる場合、修飾されると理解されるべきである。従って、特に示されない限り、以下の明細書及び特許請求の範囲で示される数値特性は、本発明の実施態様で得られるべく求められる所望の特性によって変化してもよい近似値である。本発明の広い範囲を示す数値範囲及びパラメータが近似値であるのにもかかわらず、特定の実施例で示される数値はできるだけ正確に報告される。しかしながら、どんな数値も、それらの各測定で見つけられ誤差から必然的に生じる特定の誤差を本質的に含有する。]
[0016] 本明細書で使用されるとき、用語「アルキル」は、置換されていてもよい直鎖、分枝鎖、環状の飽和又は不飽和の炭化水素鎖を指す。
本明細書で使用されるとき、用語「ハロゲン」又は「ハライド」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を指す。]
[0017] 本明細書で使用されるとき、用語「アリール」は、置換されていてもよい芳香族の単環式又は二環式の炭化水素を指す。ヘテロアリールは、芳香族環構造にて１以上のヘテロ原子、たとえば、窒素、イオウ又は酸素を持つアリール化合物を指す。]
[0018] 本明細書で使用されるとき、用語「接触させること」は、阻害剤を細胞に接触させる任意の好適な方法を言う。一部の例では、細胞は異常に増殖する細胞である。試験管内（in vitro）すなわち生体外（ex vivo）で、好適な培地中の阻害剤に細胞を暴露することによってこれが達成される。生体内（in vivo）での適用については、どの既知の投与方法も好適である。]
[0019] 本明細書で使用されるとき、用語「治療すること」又は語句「癌を治療すること」には、癌細胞の成長を中止させること、癌細胞若しくはそれらを含む塊を殺傷すること、又は癌細胞の数若しくはそれらを含む塊のサイズを減らすことが挙げられるが、これらに限定されない。成長を中止させることは、癌細胞のサイズ若しくは数又はそれらを含む塊における増大を止めること又は癌細胞の分裂を止めることを言う。サイズを小さくすることは、癌細胞を含む塊のサイズ又は同細胞の数若しくはサイズを小さくすることを言う。当業者に明らかであるように、用語「癌」又は「癌細胞」又は「腫瘍」は、新生物の細胞増殖性疾患の例を意味し、悪性新生物細胞の塊又はそれを含む悪性組織を意味する。]
[0020] 本明細書で使用されるとき、細胞増殖性疾患に関連する細胞、たとえば、癌若しくは腫瘍を含む細胞又は悪性の細胞又は異常に増殖する細胞においてチューブリンの重合を「阻害すること」又はその「阻害」という用語は、チューブリン形成の部分的な又は全体の阻害を含み、細胞増殖性疾患に関連する細胞の増殖又は成長の速度の低下を含むことも意味する。組織培養若しくは細胞培養における標的となる悪性細胞若しくは異常に増殖する細胞におけるチューブリンの重合、動物における腫瘍の成長に対する、試験要素の効果を評価することによって、又は当業者に既知のあらゆる方法によって、本発明の組成物の生物学的阻害用量を決定することができる。]
[0021] 本明細書で使用されるとき、用語「対象者」は、治療のあらゆる標的物を言う。
本発明の実施態様によれば、インドール誘導体化合物が提供される。これらの化合物は、]
[0022] ]
[0023] の構造式を有し、又はその薬学上許容可能な塩若しくは水和物をであり、式中、
Ｒ１は、Ｈ、ハライド、ＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、−ＯＣＨ３又はＣＮアルキル、アルケニル、Ｏ−アルキル及びＯ−アリールであり、ｎは０、１、２、３、又は４であり；
Ｒ２は、Ｈ又は−ＳＯ２Ｐｈであり；
Ｒ３は、Ｒ４によってＣ３又はＣ５にて置換されたフェニル；Ｒ８Ｒ９；Ｒ１２Ｒ１３；２−、３−又は６−インドリルによってＣ１、Ｃ２又はＣ３にて置換された２−、３−又は６−インドリル（インドリル部分のいずれかは独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換される）；又は、Ｃ５、Ｃ６又はＣ７にて２−、３−又は６−インドリルによって置換されたナフチル又は置換されないナフチル（インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換される）であり；
Ｒ４は、Ｒ５、Ｃ１〜３アルキレン−Ｒ５、Ｃ（Ｏ）Ｒ６、ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｒ７）−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７−Ｒ６、−Ｏ−Ｃ（Ｒ７）−Ｒ６、Ｒ８、Ｒ７Ｒ８−（２−、３−若しくは６−インドリル）、Ｒ８−（２−、３−若しくは６−インドリル）（インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換され）、Ｒ８Ｒ９又はＲ１２Ｒ１３であり；
Ｒ５は、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１−３アルキル、Ｎ＝Ｎ＝Ｎ、ＣＮ又はＯＲ６であり；
Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−３アルキル、又はＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって独立して置換された５員環若しくは６員環であり；
Ｒ７は、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり；
Ｒ８は、−ＣＨ２、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｃ＝ＣＨ２、Ｃ＝ＮＯＨ、Ｃ＝Ｎ（ＮＨ２）であり；
Ｒ９は、Ｃ３にてＲ１０によって、及びＣ４とＣ５にてＲ１１によって独立して置換されたフェニル、Ｃ４にて−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３によって置換されたチアゾリル、又はＣ５、Ｃ６若しくはＣ７にて２−、３−若しくは６−インドリルによって置換されたナフチル又は置換されないナフチルであり、インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換され；
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、−ＯＣＨ３、フェニル、ナフチルであり、又はＣ４のＲ１１とジオキソリル環を形成し；
Ｒ１１は、Ｈ、ＯＨ又は−ＯＣＨ３であり；
Ｒ１２は、ピロリル、フラニル、チエニル又はシクロペンタジエニルであり；
Ｒ１３は、それぞれ独立してＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって置換された−Ｃ（Ｏ）−２−、３−若しくは６−インドリル、−Ｃ（Ｏ）−イミダゾール、−Ｃ（Ｏ）−チアゾール、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−イソオキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−ベンズオキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−ピロール、−Ｃ（Ｏ）−フラン、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾリン、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾリジン、−Ｃ（Ｏ）−オキサジアゾール、−Ｃ（Ｏ）−ナフチル又は−Ｃ（Ｏ）−フェニルである。]
[0024] 一部の例では、Ｒ１はＨであってもよく、Ｒ３はＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであってもよく、Ｒ４はＲ８であってもよい。例には、以下の構造を有する化合物が挙げられるが、これらに限定されない。]
[0025] ]
[0026] ほかの例では、Ｒ１はＨ又はＦであってもよく、Ｒ３はＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであってもよく、Ｒ４は−Ｒ８（２−若しくは３−インドリル）であってもよい。例には、以下の構造を有する化合物が挙げられるが、これらに限定されない。]
[0027] ]
[0028] 他の例では、Ｒ３はＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであってもよく、Ｒ４は−Ｒ７Ｒ８−（２−、３−若しくは６−インドリル）であってもよい。好適な化合物の例には、以下の構造を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。]
[0029] ]
[0030] 他の例では、Ｒ３はＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであってもよく、Ｒ４はＲ８Ｒ９であってもよい。好適な化合物の例には、以下の構造を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。]
[0031] ]
[0032] 一部の例では、化合物は、]
[0033] ]
[0034] の構造を有してもよい。
ほかの例では、Ｒ３は２−、３−、又は６−インドリルであってもよい。好適な化合物の例には、以下の構造を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。]
[0035] ]
[0036] ほかの例では、Ｒ３はナフチルであってもよい。好適な化合物の例には、以下の構造を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。]
[0037] ]
[0038] ほかの例では、Ｒ３はＲ８Ｒ９である。好適な化合物の例には、以下の構造を有するものが挙げられるが、これらに限定されない（式中、Ｙは、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ３から独立して選択される）。]
[0039] ]
[0040] ほかの例では、Ｒ３はＲ１２Ｒ１３である。好適な化合物の例には、以下の構造を有するものが挙げられるが、これらに限定されない（式中、Ｚは、Ｓ、Ｏ、ＮＨ及びＣＨ２から独立して選択される）。]
[0041] ]
[0042] これらの化合物は好適な方法で合成することができる。たとえば、本明細書で提示される実施例で記載されるような技法を用いて化合物を合成してもよい。炭素原子の番号付けは、インドールにおける窒素へテロ原子がＣ１であり、インドールのＣ２に連結するフェニル部分の炭素原子がＣ１である標準的なプロトコールを用いる。この番号付けプロトコールは、これらのインドール又はジインドールの誘導体又は類似体を含む置換基環構造、たとえば、環状アルキル、アリール又はヘテロアリールにも使用される。]
[0043] 一部の実施態様では、化合物又は薬学上許容可能なキャリアとの化合物の組み合わせは、医薬組成物を構成することができる。
ほかの実施態様では、薬理学上有効量の本明細書で記載される化合物の少なくとも１つに、細胞増殖性疾患に関連する細胞を接触させることを含む、細胞増殖性疾患に関連する細胞においてチューブリンの重合を阻害する方法が提供される。この実施態様では、細胞増殖性疾患は、癌であってもよい。癌の代表例には、前立腺癌、結腸癌又は乳癌が挙げられる。]
[0044] さらにほかの実施態様では、薬理学上有効量の本明細書に記載される化合物の少なくとも１つを対象者に投与することを含む対象者における癌を治療する方法が提供され、その際、該化合物は癌細胞の成長を抑制し、それによって癌を治療する。この実施態様では、癌の代表例には、前立腺癌、結腸癌又は乳癌が挙げられる。]
[0045] 本明細書で提供される化合物は、ＡＴＰ結合カセットトランスポータが介在する多剤耐性を回避する一方で、細胞においてチューブリン又はチューブリンの重合を阻害することによって細胞増殖性疾患において異常に増殖する細胞の成長を抑制する治療法として有用であり得る。異常に増殖する細胞を本化合物に接触させることが、アポトーシス及び／又は細胞周期の停止を誘導するのに有効であることが考えられる。従って、本発明の化合物は対象者の癌を治療するのに有用であり得る。一部の例では、該対象者は哺乳類である。ほかの例では、該対象者はヒトである。癌の例には、前立腺癌、結腸癌又は乳癌が挙げられるが、これらに限定されない。]
[0046] これらの化合物又は薬理学上許容可能なその塩若しくは水和物の投薬処方は、投与方法に好適な従来の非毒性で、生理学的に又は薬学上許容可能なキャリア又はビヒクルを含んでもよい。これらの化合物又はその医薬組成物を１回以上、独立して投与し、これらの化合物又はそのほかの抗癌薬若しくは抗癌剤に由来する薬理学的な又は治療上の効果を達成、維持、又は改善し得る。投与量を決定すること又は好適な投与量が単回投与用量若しくは複数回投与用量を含むかどうかを決定することは十分に当業者の技量の範囲内である。適当な投与量は、対象者の健康状態、癌の進行又は寛解、使用される投与経路及び処方に依存する。]
[0047] 以下の実施例は本発明の種々の実施態様を説明する目的のために提供されるのであって、どのような方法であっても本発明を限定することを意味するものではない。]
[0048] 実施例１
化合物の合成
一般的な合成スキーム
既知の合成方法を用いて図１に示すように化合物１０、１１及び１３を合成する。図１の合成スキームに示すように、以下に記載する一般的な手順を用いて、ＮａＯＨのエタノール溶液の還流下にて相当する前駆体化合物９、８及び１２から保護基ベンゼンスルホニルを外すことによってメチルフェニルリンカーを介して架橋された標的ジインドール１０、１１及び１３を調製した。中間体化合物８が、その後の化合物１０、１１及び１３の合成の鍵である。化合物８は、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の存在下、保護されたインドール１の保護されたインドールベンズアルデヒド化合物５とのカップリングから９４％の収率で合成される。２つの異なったスズキカップリングの経路、経路Ａ及び経路Ｂを用いて化合物５を合成することができる。]
[0049] 経路Ａについては、ＬＤＡによる保護されたインドール１のリチオ化でインドール２を得た後、臭化シアン（ＢｒＣＮ）による臭素化によってブロモインドール３を生成した。合成されたブロモインドール３をアルデヒドフェニルホウ酸４とカップリングさせて化合物５を得た。経路Ｂについては、市販のヨードフェニルアルデヒド６と保護されたインドールホウ酸７を用いて化合物５を調製した。]
[0050] トリエチルシランとトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて、化合物８におけるフェニルメタノールリンカーを室温にて収率６７％で化合物９におけるフェニルメチレンに付加的に還元した。この還元では、別のシリル化剤としてのトリフェニルシランは、その嵩高な基の妨害のためにその収率は乏しかった。メチルフェニル連結したジインドール化合物１０は、一般的な手順によって保護されたジインドール９から得た。２０時間のエタノール還流下、水酸化ナトリウム（１０当量）で化合物８を処理することによって遊離のメタノール連結ジインドール１１を生成した。]
[0051] 化合物８のフェニルメタノールリンカーをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のジクロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）によって酸化することにより、保護されたフェニルメタノン連結化合物１２を収率７３％で合成した。一般的な手順で化合物１２からフェニルメタノン連結化合物１３を収率８３％で合成した。]
[0052] ２−ブロモ−１−（ベンゼンスルホニル）インドール（３）の合成]
[0053] ]
[0054] ケチャ（Ketcha）の方法（１）によって化合物１２を調製した。計算上の質量３３４．９６、［Ｍ−Ｈ］３３４．１、Ｃ１４Ｈ１０ＢｒＮＯ２Ｓについての分析計算値；Ｃ、Ｈ、Ｎ。]
[0055] ３−（１−（ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）ベンズアルデヒド（５）の合成]
[0056] ]
[0057] 経路Ａ又は経路Ｂを用いてスズキのカップリングによって化合物５を生成した。経路Ａ及び経路Ｂは、オルガノボロン酸をハロゲン化アリールとカップリングさせる同じ手順を利用するが、経路Ａは本明細書で記載されるようにハロゲン化アリール化合物３とオルガノボロン酸化合物４を使用する。経路Ｂは、ハロゲン化アリール化合物１−ヨード−３−ホルミルベンゼン６とオルガノボロン酸１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール−２−イル−ボロン酸７を使用する。化合物の構造は図１に示す。]
[0058] ジメトキシエタン（ＤＭＥ）（１０ｍＬ）中の２−ブロモ−１−（フェニルスルホニル）−１Ｈ−インドール３（３３０ｍｇ、０．９９ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３４ｍｇ、０．３マイクロモル）及び３−ホルミルフェニルホウ酸４（１７７ｍｇ、１．１８ミリモル）と、炭酸ナトリウム（脱酸素水中２Ｍを１ｍＬ）との混合物を撹拌し、加熱して、ＴＬＣにてブロモインドール３が検出されなくなるまで２時間還流した。該混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌと水で洗浄し、ＭｇＳＯ４の上で乾燥させた。減圧して溶媒を除き、次いで、溶離液としてＥｔＯＡｃ／Ｈｘ（１：５）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、黄色っぽい固形物として化合物５（３３６ｍｇ、９４％）を得た。融点１２６〜１３８℃；Ｃ２１Ｈ１５ＮＯ３Ｓについての分析計算値；Ｃ、Ｈ、Ｎ。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１０．１（ｂｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），８．３３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．９８（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．８５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７，８Ｈｚ，ＡｒＨ），７．５１−７．２９（ｍ，８Ｈ，ＡｒＨ），６．６６（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１９２．１，１４０．５，１３８．６，１３７．６，１３６．６，１３６．１，１３４．０，１３３．７，１３１．１，１３０．６，１３０．０，１２９．０（２Ｃ），１２８．５，１２６．８（２Ｃ），１２５．６，１２５４．９，１２１．２，１１６．８，１１４．９。]
[0059] （１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）−［３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］メタノール（８）の合成]
[0060] ]
[0061] 保護されたインドール１（２．３７ｇ、６．５６ミリモル）の３０ｍＬテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液に、２．０ＭのＬＤＡのＴＨＦ溶液（４．７５ｍＬ、９．５ミリモル）を−７８℃にて１０分以内に加えた。該溶液を０℃で３０分間撹拌し、次いで−７８℃に冷却した。この温度にて、無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解したアルデヒドインドール５（２．０３ｇ、７．８８ミリモル）を加えた。得られた混合物を一晩撹拌し、室温まで温めた。該溶液を１００ｍＬのＥｔＯＡｃに注いだ。合わせた有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌと水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。減圧して溶媒を除き、次いで、溶離液としてＥｔＯＡｃ／Ｈｘ（１：３）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、黄色っぽい固形物として化合物８（３．３２ｍｇ、８２％）を得た。計算上の質量６１８．１３、［Ｍ＋Ｎａ＋］６４１．２；融点８１〜８３℃；Ｃ３５Ｈ２６Ｎ２Ｏ５Ｓ２についての分析計算値；Ｃ、Ｈ、Ｎ；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．２９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．６１（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５６−７．０６（ｍ，１７Ｈ，ＡｒＨ），６．５７（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．４８（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．４２（ｓ，１Ｈ，ＣＨ），３．６４（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１４３．３，１４１．３，１４０．０，１３８．０，１３７．８，１３６．９，１３６．８，１３３．５，１３３．１，１３２．１，１３０．１，１２９．６，１２８．９，１２８．６（２Ｃ），１２８．５，１２８．１（２Ｃ），１２７．１，１２６．９，１２６．２（２Ｃ），１２５．９（２Ｃ），１２４．７，１２４．５，１２４．１，１２３．５，１２１．０，１２０．４，１１６．１，１１４．２，１１３．７，１１２．０，６８．８。]
[0062] （１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）−［３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］メタン（９）の合成]
[0063] ]
[0064] 化合物８（２０１ｍｇ、０．３２ミリモル）とトリエチルシラン（０．１ｍＬ、０．６５ミリモル）の５ｍＬ無水ＣＨ２Ｃｌ２溶液を３０分間撹拌した後、ＴＦＡ（０．１６ｍＬ、１．９５ミリモル）を加えた。室温にて１時間、該溶液を撹拌し、１０ｍＬのＨ２Ｏを該溶液に加え、氷冷しながら固形のＮａ２ＣＯ３によって該溶液を慎重に中和した。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、濃縮し、次いで溶離液としてＥｔＯＡｃ／Ｈｘ（１：５）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、黄色っぽい固形物として化合物９（１３０ｍｇ、６７％）を得た。計算上の質量６０２．１３、［Ｍ＋Ｎａ＋］６２５．２；融点７６〜７８℃；Ｃ３５Ｈ２６Ｎ２Ｏ５Ｓ２０．２Ｃ４Ｈ８Ｏ２についての分析計算値；；Ｃ、Ｈ、Ｎ；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６７（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．５１−７．１２（ｍ，１８Ｈ，ＡｒＨ），６．５２（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．３０（ｓ，１Ｈ，ＣＨ），４．３４（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１４１．４，１４０．１，１３８．５，１３７．８，１３６．９，１３６．７，１３４．５，１３３．２，１３３．０，１３２．２，１３０．６，１３０．２，１２９．１，１２９．０，１２８．７（２Ｃ），１２８．５（２Ｃ），１２８．０，１２７．１，１２６．２（２Ｃ），１２５．９（２Ｃ），１２４．４，１２３．９，１２３．７，１２３．１，１２０．２，１２０．０，１１６．１，１１４．２，１１３．４，１１０．９，３４．６。]
[0065] 化合物１０、１１及び１３の調製のための一般的な手順
化合物、保護されたインドール（０．５６ミリモル）の１０ｍＬエタノール溶液に、１０％のＮａＯＨ（２２７ｍｇ、５．６８ミリモル）溶液を加え、該混合物を２０時間還流した。次いでエタノールを蒸発させ、ブラインとＣＨ２Ｃｌ２を加え、有機相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、次いで溶離液としてＥｔＯＡｃ／Ｈｘ（１：１）又はＣＨ２Ｃｌ２／Ｈｘ（１：１）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、標的の遊離インドール化合物（６９％〜９１％）を得た。]
[0066] （１Ｈ−インドール−２−イル）−［３−（１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］メタン（１０）の合成]
[0067] ]
[0068] 上述した一般的な手順によって化合物９から化合物１０を合成する。茶色の固形物；収率９１％；計算上の質量３２２．１５、［Ｍ−Ｈ］３２１．２；融点１９３〜１９４℃；Ｃ３５Ｈ２６Ｎ２Ｏ５Ｓ２についての分析計算値；Ｃ、Ｈ、Ｎ；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）ｄ８．３０（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８２（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．６３−７．５４（ｍ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．４２−７．３７（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．２７−７．０１（ｍ，６Ｈ，ＡｒＨ），８．８２（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．３４（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），４．１９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１３８．８，１３６．９，１３６．８，１３６．３，１３５．８，１３２．４，１２８．９，１２８．７，１２８．１，１２７．７，１２４．８，１２３．２，１２１．９，１２０．９，１２０．１，１１９．９，１１９．５，１１９．３，１１０．４，１１０．０，１００．９，９９．７，３４．３。]
[0069] （１Ｈ−インドール−２−イル）−［３−（１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］メタノール（１１）の合成]
[0070] ]
[0071] 上述した一般的な手順によって化合物８から化合物１１を合成する。収率６９％；茶色の固形物；計算上の質量３３８．４０、［Ｍ−Ｈ］３３７．２；Ｃ２３Ｈ１８Ｎ２Ｏについての分析計算値；Ｃ、Ｈ、Ｎ；融点８２〜８５℃；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３７（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２６（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．７１（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６０−７．０６（ｍ，１１Ｈ，ＡｒＨ），６．８０（ｓ，１Ｈ，ＣＨ），６．３２（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），５．９７（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）ｄ１４１．８，１３９．３，１３６．９，１３６．４，１３２．３，１２８．８，１２８．６，１２８．１，１２７．５，１２５．４，１２４．５，１２２．３，１２２．０，１２１．８，１２０．２（２Ｃ），１１９．８，１１９．５，１１０．６，１１０．５，１００．７，９９．８，７０．２。]
[0072] （１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）−［３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］メタノン（１２）の合成]
[0073] ]
[0074] 化合物８（３２５ｍｇ、０．５３ミリモル）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、０℃にてジクロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ、１．２８ｍｇ、３．４ミリモル）を加えた。該混合物を室温にて２０時間撹拌した。Ｈ２ＯとＣＨ２Ｃｌ２を加え、層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２で水性相を抽出した。合わせた有機抽出物を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、次いで溶離液としてＥｔＯＡｃ／Ｈｘ（１：３）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、黄色っぽい固形物として化合物１２（２２５ｍｇ、７０％）を得た。計算上の質量６１６．１１、［Ｍ＋Ｎａ＋］６３９．２；融点１８９〜１９０℃；Ｃ３５Ｈ２４Ｎ２Ｏ５Ｓ２０．２Ｃ４Ｈ８Ｏ２についての分析計算値；Ｃ、Ｈ、Ｎ；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ８．３３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．２０−８．０６（ｍ，４Ｈ，ＡｒＨ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．８４−７．２７（ｍ，１６Ｈ，ＡｒＨ），７．１３（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．６６（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１８６．３，１４０．１，１３７．９，１３７．８，１３７．４，１３７．２，１３６．８，１３６．４，１３５．１，１３３．４，１３３．２，１３２．２，１３０．９，１２９．９，１２９．６，１２８．５（２Ｃ），１２８．３（２Ｃ），１２８．１，１２７．３，１２７．０（２Ｃ），１２６．７，１２６．１（２Ｃ），１２４．７，１２４．０，１２３．８，１２２．２，１２０．４，１１６．８，１１６．１，１１４．６，１１４．０。]
[0075] （１Ｈ−インドール−２−イル）−［３−（１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］メタノン（１３）の合成]
[0076] ]
[0077] 上述した一般的な手順によって化合物１２から化合物１３を合成する。収率８３％；茶色の固形物；計算上の質量３３６．３９；［Ｍ−Ｈ］３３５．３；融点２０６〜２０７℃；Ｃ２３Ｈ１６Ｎ２Ｏ．０．２Ｃ４Ｈ８Ｏ２のついての分析計算値；；Ｃ、Ｈ、Ｎ；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）ｄ８．３８（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１８（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８６−７．０４（ｍ，１３Ｈ，ＡｒＨ），５．７７（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ１８６．０，１３８．８，１３８．１，１３７．３，１３６．６，１３４．２，１２９．１，１２８．６，１２８．４，１２７．７，１２７．０，１２５．８，１２４．８，１２３．０，１２１．９，１２０．３，１２０．２，１１９．５，１１２．７，１１２．４，１１１．４，９９．６。]
[0078] 化合物６０と化合物５（図１Ｉと図１Ｊ）の調製のための一般的な手順Ａ
ＤＭＥ（１０ｍＬ）中のアリールブロミド１又は化合物３（０．９９ミリモル）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３４ｍｇ、０．３マイクロモル）及び３−ホルミルフェニルホウ酸４（１７７ｍｇ、１．１８ミリモル）と、炭酸ナトリウム（脱酸素水中２Ｍを１ｍＬ）との混合物を撹拌し、加熱して、ＴＬＣにてアリールブロミド１又は化合物３が検出されなくなるまで２時間還流した。該混合物を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌと水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。減圧して溶媒を除き、次いで、溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／５、ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、標的のアルデヒド化合物を得た。] 図１Ｉ 図１Ｊ
[0079] 化合物６１と化合物６６（図１Ｉと図１Ｊ）の調製のための一般的な手順Ｂ
−７８℃に冷却したブロミド５９（１．３８ミリモル）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液に、アルゴン雰囲気下でｎ−ＢｕＬｉ（０．６１ｍＬ、２．５Ｍ、１．１当量）を加えた。該溶液を３０分間撹拌し、無水ＴＨＦ中のアルデヒド６０（１．３８ミリモル）を加え、該溶液を１６時間撹拌した。水を加えて反応を止めた。ＥｔＯＡｃで反応溶液を抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させた。減圧下で溶媒を除き、次いで溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／１、ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、標的化合物を得た。] 図１Ｉ 図１Ｊ
[0080] 化合物６２、６４及び６７（図１Ｉ及び図１Ｊ）の調製のための一般的な手順Ｄ
化合物６１、６３、６６（０．５３ミリモル）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、０℃にてジクロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ、１．２８ｍｇ、３．４ミリモル）を加えた。該混合物を室温にて２０時間撹拌した。次いで、Ｈ２ＯとＣＨ２Ｃｌ２を加え、層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２で水性相を抽出した。合わせた有機抽出物を水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を蒸発させ、次いで溶離液としてＥｔＯＡｃ／Ｈｘ（１／３、ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、標的化合物を得た。] 図１Ｉ 図１Ｊ
[0081] 化合物６３（図１Ｉ）の調製のための一般的な手順Ｃ
保護されたインドール１（６．５６ミリモル）の３０ｍＬのＴＨＦ溶液に、２．０ＭのＬＤＡのＴＨＦ溶液（４．７５ｍＬ、９．５ミリモル）を−７８℃にて１０分以内に加え、０℃で３０分間撹拌し、その後−７８℃に冷却した。この温度にて、無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解したアリールアルデヒド６０（７．８８ミリモル）を加えた。得られた混合物を一晩撹拌し、室温まで温めた。該溶液を１００ｍＬのＥｔＯＡｃに注いだ。合わせた有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌと水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥させた。減圧下で溶媒を除き、次いで、溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／３、ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、化合物６３を得た。] 図１Ｉ
[0082] 化合物６５と化合物６８（図１Ｉと図１Ｊ）の調製のための一般的な手順Ｅ
保護されたインドール化合物６４及び６７（０．５６ミリモル）の１０ｍＬエタノール溶液に、１０％のＮａＯＨ（２２７ｍｇ、５．６８ミリモル）溶液を加え、該混合物を２０時間還流した。次いでエタノールを蒸発させ、ブラインとＣＨ２Ｃｌ２を加え、有機相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、次いで溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／１、ｖ／ｖ）又はＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサン（１／１、ｖ／ｖ）を用いてシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製し、標的の遊離インドール化合物を得た。] 図１Ｉ 図１Ｊ
[0083] ３’，４’，５’−トリメトキシ−ビフェニル−３−カルバルデヒド（化合物６０）の合成
方法Ａ（図１Ｉ）
収率９１％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ２９５．０（［Ｍ＋Ｎａ］＋）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） １０．１０（ｂｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），８．０７（ｔ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．８４（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．８５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８１（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），３．９５（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３），３．９１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｉ
[0084] （３’，４’，５’−トリメトキシ−ビフェニル−３−イル）−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−メタノール（化合物６１）の合成
方法Ｂ（図１Ｉ）
収率７１％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４６３．１（［Ｍ＋Ｎａ］＋）；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３） ７．６０（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．４７−７．３１（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），６．７６（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．６４（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），５．８１（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−ＯＨ），４．００（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３），３．９０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．８１（ｓ，９Ｈ，ＯＣＨ３），２．９７（ｓ，１Ｈ，ＯＨ）。] 図１Ｉ
[0085] （３’，４’，５’−トリメトキシ−ビフェニル−３−イル）−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−メタノン（化合物６２）の合成
方法Ｃ（図１Ｉ）
収率８５％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４６１．１（［Ｍ＋Ｎａ］＋）；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ８．００（ｔ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７９（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝７．５，１．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．１２（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．８１（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），３．９６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．９４（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３），３．９０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．８９（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｉ
[0086] （１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）−（３’，４’，５’−トリメトキシ−ビフェニル−３−イル）−メタノール（化合物６３）の合成
方法Ｄ（図１Ｉ）
収率８４％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５５２．２（［Ｍ＋Ｎａ］＋）；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ８．００（ｔ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７９（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝７．５，１．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．１２（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．８１（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），３．９６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．９４（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３），３．９０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．８９（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｉ
[0087] （１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）−（３’，４’，５’−トリメトキシ−ビフェニル−３−イル）−メタノン（化合物６４）の合成
方法Ｃ（図１Ｉ）
収率８５％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５２８．３（［Ｍ＋Ｈ］＋）；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ８．２１（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．１７−８．０６（ｍ，３Ｈ，ＡｒＨ），７．９４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５８−７．４６（ｍ，６Ｈ，ＡｒＨ），７．３４−７．３２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．０１（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），６．８３（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），３．９５（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３），３．９１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｉ
[0088] （１Ｈ−インドール−２−イル）−（３’，４’，５’−トリメトキシ−ビフェニル−３−イル）−メタノン（化合物６５）の合成
方法Ｅ（図１Ｉ）
収率７５％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３８５．９（［Ｍ−Ｈ］−）；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ９．６２（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１７（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．８２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．７３（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．４０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．２１−７．１６（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．８６（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），３．９５（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３），３．９３（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｉ
[0089] ［３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−メタノール（化合物６６）の合成
方法Ｂ（図１Ｊ）
収率７１％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５５２．２（［Ｍ＋Ｈ］＋）；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ８．３０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６３（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．４９−７．１６（ｍ，１２Ｈ，ＡｒＨ），６．７１（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．５６（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−ＯＨ），５．８７（ｂｓ，１Ｈ，ＣＨ−ＯＨ），３．８７（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３），３．８５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｊ
[0090] ［３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル］−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−メタノン（化合物６７）の合成
方法Ｃ（図１Ｊ）
収率６９％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ５５０（［Ｍ＋Ｎａ］＋）；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ８．３１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），８．０２（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．７３（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．５０−７．３１（ｍ，８Ｈ，ＡｒＨ），７．２７（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．６５（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），４．０１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．９９（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｊ
[0091] ［３−（１Ｈ−インドール−２−イル）−フェニル］−（３，４，５−トリメトキシ−フェニル）−メタノン（化合物６８）の合成
方法Ｅ（図１Ｊ）
収率９５％
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３８５．９（［Ｍ−Ｈ］−）；
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） ８．９４（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１７（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．９４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．６９（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．２５−７．１５（ｍ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．１２（ｓ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．９２（ｓ，１Ｈ，ＡｒＨ），３．９８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），３．８５（ｓ，６Ｈ，ＯＣＨ３）。] 図１Ｊ
[0092] 実施例２
一般的な化合物の類似体のための追加の合成スキーム
化合物の類似体１４〜２０
ジインドール１３の構造的類似体を図１Ｂに示す。図１Ｃ〜図１Ｅに示すスキーム２〜４（７６〜７８）で概説された一般的な合成計画に従って構造的類似体化合物１４〜２０を合成する。類似体化合物１４については、スキーム２に示すように種々の置換インドール環を調製する。これを達成するには、市販の試薬から種々のＮ保護されたインドール３３を合成し、インドールの２位にて臭素化してそれらに相当するブロミド３４を生成する。次にスズキ反応を介してブロミドをアルデヒドホウ酸４にカップリングして、このアプローチの鍵となる中間体である、相当するアルデヒド−インドール３５を得る。] 図１Ｂ 図１Ｃ 図１Ｄ 図１Ｅ
[0093] スキーム３に示すように、塩基性の条件下でこの部類のアルデヒド−インドール５Ａを２−Ｎ−保護インドール１と反応させて位置選択性の脱プロトン化を促進し、高収率でヒドロキシメチレン化合物８Ａを生成する。次いで、ＤＭＦ中にて化合物８Ａのメタノール結合のジクロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）による酸化によって相当するメチルケトン１２Ａを調製する。Ｎ−保護された基の脱保護によって、インドール系にて種々の位置で種々の異なった置換基を組み入れている基本構造１４の一連の標的インドール生成物が得られる。たとえば、Ｘは、ハライド、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、ＣＨ３、ＮＯ２、ＣＮ又はＣＦ３であってもよい。]
[0094] 図１Ｂにおける化合物１５及び１６については、スキーム４（図１Ｄ）で示すように、ブロミド３６及び３７のアルデヒドホウ酸との各スズキ反応によってインドールの３位で結合するアルデヒド−インドール３８及びインドールの４位、５位、６位又は７位で結合するアルデヒド−インドール３９を調製する。上述のそれら（５）に類似する手順を用いて、スキーム４の一番下に示すように、図１Ｂに示すビフェニル１７、β−ナフチル１８、置換アリール１９及び３，４−メチレンジオキシフェニル２０の類似体を合成する。これらの手順は、提案された化合物に対して迅速で、信頼性のある高い収率の合成方法を提供する。] 図１Ｂ 図１Ｄ
[0095] インドール環におけるＣ３にて置換されたほかのインドール誘導体が合成されてもよいことが考えられる。たとえば、それ自体が置換されたチアゾール環を含むＣ３における置換基によってインドールが誘導体化されてもよい。たとえば、化合物５９、メチル２−（１Ｈ−インドール−３−カルボニル）チアゾール−４−カルボキシレートは構造：]
[0096] ]
[0097] を有する。
化合物６５を含む化合物１７の類似体は、図１ｉに示すように合成された。]
[0098] ]
[0099] 化合物の類似体２１〜２３
構造的類似体２１〜２３、すなわち、化合物２１と２２と２３（図１Ｂ）の非置換の及び置換された誘導体もスズキ反応を用いて合成する。しかしながら、この場合、ハロゲン化されたインドールをリチウム塩に変換し、次いでホウ酸トリメチルと反応させて必要とされるホウ酸３を生成し、次いでそれを適当な臭素化されたアルデヒドチオフェン（Ｘ＝Ｓ）、フラン（Ｘ＝Ｏ）、ピロール（Ｘ＝ＮＨ）又はシクロペンタジエン（Ｘ＝ＣＨ２）の誘導体４Ｂと反応させて種々の複素環結合のジインドール５Ｂ（スキーム５、図１Ｆ）を得る。スキーム３（図１Ｄ）に示すようにリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）とＰＤＣを用いて、今度はこれらの誘導体を相当する複素環結合を持つジインドールに変換する。環の配向及びベンジルリンカーの位置における複素環置換の重要性を決定するために、２，４位及び２，５位における結合を合成する。] 図１Ｂ 図１Ｄ 図１Ｆ
[0100] 図１Ｊに示すように類似体６８、化合物２３のトリメトキシ誘導体を合成した。] 図１Ｊ
[0101] ]
[0102] 化合物の類似体２４〜２８
化合物２４から２８（図１Ｂ）の類似体を合成して、メチルケトン結合が薬理学活性に決定的に必要とされるかどうかを判定する。種々のチオケトン２４、エステル２５と２７、及びアミド２６と２８を合成して、水素結合受容体、結合の長さ、及びケトンの位置（すなわち、ベンジルリンカー又はインドール環に隣接する）の活性への寄与を検討する。硫化水素を用いて相当するメチルケトン誘導体から直接チオフェン類似体２４を合成する（スキーム６、図１Ｇ）（６〜７）。一方で、エステル誘導体とアミド誘導体は、以前記載されたように（８〜１０）２−アミノ４７又は２−ヒドロキシ−インドール４６の４５との反応によって合成する。] 図１Ｂ 図１Ｇ
[0103] 化合物の類似体２９〜３１
２９〜３１の類似体化合物、置換された及び非置換の誘導体(図１Ｂ）の双方を合成して、チューブリンの阻害、抗癌活性、輸送及び肝臓についての構造活性相関を割り出す。ヨードインドール５６をリチオ化し、臭素化されたアルデヒド化合物５５とカップリングさせて相当するアルコールを得、その後、それをＰＤＣとカップリングさせてメチルケトン５７にすること以外、スキーム２〜６（図１Ｃ〜１Ｇ）で記載されるものとほぼ同一であるスキーム７（図１Ｈ）に示すような反応条件を用いて類似体を合成する。] 図１Ｂ 図１Ｃ 図１Ｄ 図１Ｅ 図１Ｆ 図１Ｇ 図１Ｈ
[0104] 実施例３
試験管内（in vitro）及び生体内（in vivo）の方法
９６穴プレートにて様々な濃度の化合物と一緒に９６時間インキュベートした後、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを用いて細胞の生存率（ＬＮＣａｐ、ＰＣ−３前立腺、ＤＵ１４５、ＰＰＣ−１及びＴＳＵ−Ｐｒ１前立腺癌細胞株、ＨＴ−２９結腸癌細胞株、及びＭＣＦ−７乳癌細胞株）を定量した。白血病細胞（Ｋ５６２及びドキソルビシン耐性のＫ５６２／Ｄｏｘ）の細胞生存率は、９６穴プレートにて様々な濃度の化合物と一緒に９６時間インキュベートした後、ＭＴＴアッセイによって定量した。薬剤が誘導するアポトーシスは抗ヒストンＥＬＩＳＡ及びＤＮＡラダー形成によって測定した。細胞周期の進行は、ヨウ化プロピジウム染色及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）解析によって評価した。試験管内のチューブリンの重合アッセイは、製造元の指示書に従ってＣｙｔｏＤＹＮＡＭＩＸスクリーンＴＭ３（ＣＤＳ−０３）キットによって測定した。様々な濃度の化合物１３との２４時間のインキュベーション後、ＬＮＣａｐおよびＰＣ−３中の抗アポトーシスタンパク質（Ｂｃｌ−２及びＢｃｌ−ｘ）及びアポトーシス促進性タンパク質（Ｂａｘ）を、ウエスタンブロット法によって調べた。５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ及び１５０ｍｇ／ｋｇを２週間静脈内に投与することによって生体内ＰＣ−３異種移植試験を行った。]
[0105] 実施例４
試験管内における癌細胞株に対する種々の化合物の効果
化合物１３及び化合物６８で処理した様々な癌細胞株のＩＣ５０
１０％ウシ胎児血清を含有する必要とされる増殖培地にて、細胞株によって８００〜５，０００細胞／ウェルの密度で９６穴プレートに細胞を播種した。種々の細胞密度及びインキュベーション時間を用いて各細胞株で予備試験を行い、適当な播種密度を決定した。当該化合物をＤＭＳＯに溶解し、細胞培養培地で希釈し（ＤＭＳＯの最終濃度が０．５％ｖ／ｖ未満）、０〜１００μＭに及ぶ最終濃度で４つ組のウェルに加えた。薬剤なしのビヒクルのみを加える対照ウェルを陰性対照として含めた。]
[0106] ５％の二酸化炭素を含有する湿った雰囲気で３７℃にて細胞を９６時間インキュベートした。国立癌研究所（１１）によって採用されたようなスルホローダミンＢアッセイを用いて、薬剤の処理後、細胞数を定量した。各薬剤濃度での細胞の生存率は、ビヒクル処理の対照ウェルで認められたものに比べて存在する細胞の比率として算出し、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ（商標）（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社）を用いた非線形最小二乗回帰によって未処理の対照と比べて５０％細胞数を減らす濃度（すなわち、ＩＣ５０）を決定した。]
[0107] 様々な濃度の前駆体インドール化合物３と７、及び新規のジインドール化合物５、８、１０、１１、１２、１３も調べた。既知の化合物、インドールとジ（１Ｈ−インドール−３−イル）メタンと化合物７の３−イルホウ酸類似体についてのＩＣ５０も調べた。表１は、４種の前立腺癌細胞株（ＬＮＣａｐ、ＰＣ−３、ＤＵ１４５、ＰＰＣ−１）、２種の膀胱癌細胞株（ＴＳＵ−Ｐｒ１とＴＣＣＳＵＰ）、結腸癌細胞株（ＨＴ−２９）、乳癌細胞株（ＭＣＦ−７）及び線維芽細胞株（ＣＶ−１）を含む種々の固形腫瘍細胞株に対して調べた化合物のＩＣ５０及びＫｉを示す。]
[0108] 化合物１３は、対照化合物ジ（１Ｈ−インドール−３−イル）メタン又はそのほかの調べた化合物よりも有意に低いＩＣ５０を有する。ジインドール１３は、調べた固形腫瘍細胞株すべてにおいて、３４〜１６２μＭに及ぶＩＣ５０値の強力な増殖抑制効果を明らかにした（表１）。ジインドール１０と１１は、これらの細胞株において有意にあまり強力ではなかった。ジインドール１０のＩＣ５０値は、ＨＴ−２９細胞で０．７２μＭからＬＮＣａｐ、ＰＣ−３及びＰＰＣ−１の細胞株で＞５０μＭに及んだ。同様に、ジインドール１１についてのＩＣ５０値が、ＬＮＣａｐ及びＰＣ−３の細胞株で５．６μＭ及び１３．５μＭであったということは、抗癌活性に対するメタノン結合の重要性、及びおそらく、この位置での水素結合受容体の存在を示唆している。比較すると、ＭＣＦ−７及びＨＴ−２９細胞におけるパクリタキセルについてのＩＣ５０値は、約２．５ｎＭである（１２）。化合物１１、インドール誘導体３−（１Ｈ−インドール−２−イル）フェニル）メタノール、及びインドール類似体、メチル２−（１Ｈ−インドール−３−カルボニル）チアゾール−４−カルボキシレートは、調べなかった（ＮＴ)。]
[0109] ]
[0110] ]
[0111] 白血病細胞株Ｋ５６２対Ｋ５６２／Ｄｏｘにおける様々な薬剤のＩＣ５０
９６穴プレートに細胞を播種し、様々な濃度の化合物１３、６８又はそのほかの抗癌剤と共に９６時間インキュベートした。ＭＴＴアッセイによって細胞の生存率を定量した。ＷｉｎＮｏｎＬｉｎを用いた非線形最小二乗回帰によって未処理の対照に比べて細胞成長を５０％抑制する濃度（ＩＣ５０）を決定した。表２は、Ｋ５６２細胞株とドキソルビシン耐性のＫ５６２／Ｄｏｘ細胞株における化合物１２とそのほかの抗癌剤のＩＣ５０の比較である。ドキソルビシン耐性の細胞株における化合物１３と６８のＩＣ５０の上昇は、ドキソルビシン、ビンブラスチン及びタキソールの上昇に比べて少なかった。]
[0112] ]
[0113] 化合物１３はアポトーシス及びＤＮＡの断片化を誘導した
１００ｎＭの化合物１３をＬＮＣａＰと共に２４時間、及びＰＣ−３と共に４８時間インキュベートした。抗ヒストンＥＬＩＳＡは複数の細胞株においてアポトーシスを検出した（図２Ａ）。結果を濃縮係数（enrichment factor）（濃縮係数＝処理した細胞のＯＤ／対照細胞のＯＤ）として表す。ＬＮＣａＰ細胞及びＰＣ−３細胞における抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−２とＢｃｌ−ｘ及びアポトーシス促進性タンパク質Ｂａｘのウエスタンブロットを行った。双方の細胞株にて化合物１３の濃度を高めることによってＢｃｌ−２が低下した（図２Ｂ）。] 図２Ａ 図２Ｂ
[0114] 様々な時間、様々な濃度の薬剤でＬＮＣａＰ細胞及びＰＣ−３細胞を処理した。インキュベーのション最後に、浮遊細胞及び付着細胞の双方を回収した。細胞を溶解し、低分子量のＤＮＡを沈殿させ、１．２％アガロースゲル電気泳動によって分離した。臭化エチジウムとＵＶ透照によってＤＮＡを可視化した。化合物１３は細胞内でＤＮＡの断片化を誘導した（図２Ｃ）。] 図２Ｃ
[0115] 化合物１３は、Ｇ２／Ｍ期にてＬＮＣａｐ細胞を止め、チューブリンの重合を阻害する
０、５０、１００及び２００ｎＭの化合物１３でＬＮＣａｐ細胞を２４時間処理した(図３Ａ）。次いで細胞を回収し、７０％エタノールで固定した。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色によって細胞周期の分布を決定し、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）解析によって解析した。] 図３Ａ
[0116] ８０ｍＭのＰＩＰＥＳ（ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸））と２ｍＭのＭｇＣｌ２と０．５ｍＭのエグタズ酸と１．０ｍＭのグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、ｐＨ６．９から構成される１００μＬのＧ−ＰＥＭ緩衝液に、化合物１２の非存在下又は存在下で５％グリセロールを加えたものに４℃にてチューブリンタンパク質（９９％を超える純度）を懸濁した（試料当たり３００μｇ）。事前に温めた９６穴プレートに試料混合物を移し、３７℃で３４０ｎｍにて毎分ごとに吸収を３０分間検出した。２０μＭの化合物１３が、チューブリンの重合を完全に阻止できる（図３Ｂ）。] 図３Ｂ
[0117] 実施例５
癌細胞株に対する化合物１３の生体内での効果
ＩＣＲマウスにおける化合物１３の亜慢性毒性のレベル
マウスにおける最大耐性用量（ＭＴＤ）を同定した。５０、１００及び２００ｍｇ／ｋｇ（ＤＭＳＯへの溶解度の限度）の用量を、治験抗癌剤の最初の前臨床試験で一般的に使用される投薬計画である（１２）４週間（５日間投与／２日間休薬）、皮下に投与した。処理した動物における体重の変化及び疾病率を毒性の直接的な尺度として使用した。図４に示すように、すべての用量の忍容性は一般に良好であった。５０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇ用量のジインドール１３で処理した動物では疾病率又は体重増加速度に有意差はなかったが、最大用量では、ビヒクルのみで処理した対照動物に比べて４週間の処理期間にわたって体重増加は２０％少なかった。これらの結果は、ジインドール１３の忍容性が良好であったこと、又は迅速なクリアランスのために薬剤の測定可能な血漿濃度が達成されなかったことを示唆した。] 図４
[0118] マウスにおける化合物１３の平均血漿濃度−時間の分析結果
生体内での体内動態を概算し、亜慢性毒性試験及び来たるべき生体内の異種移植試験の結果を解釈するために、単回用量（１０ｍｇ／ｋｇ）及び種々の投与経路（静脈内、経口及び皮下）を用いた。各投与経路についてマウスの群（ｎ＝６０）にジインドール１３を投与した。１２までの様々な時点（投与前及び投与後２４時間まで）でマウス（各時点当たりｎ＝５）を屠殺し、ＨＰＬＣ分析まで血漿試料を−８０℃に保存した。ＨＰＬＣ／ＵＶ分析方法を開発し、検証して、０．０２〜２０μｇ／ｍＬの線形範囲で血漿中のジインドール１３の濃度を決定し、６％未満の濃度すべてで変異の日内係数及び日間係数を決定した。]
[0119] ビス−インドール１３の血漿濃度は静脈注射の後急速に低下し（図５）、最終半減期は３時間未満であり、クリアランスは約４Ｌ／ｈ／ｋｇ（表３）だった。ジインドール１３の静脈内投与後にマウスから採取された尿及び糞便の試料は、薬剤の５％未満が尿及び糞便にそのまま排泄されたことを示した。ジインドール１３の血漿濃度は、皮下（Ｓ．Ｃ．）投与後または経口（Ｐ．Ｏ．）投与後約３時間でピークとなり、完全な生体利用効率はそれぞれ７３％及び２９％であった。Ｐ．Ｏ．投与後の最終半減期はＩ．Ｖ．投与後に認められたものに類似したが、Ｓ．Ｃ．投与後の最終半減期がさらに長かったのは、おそらくジインドール１３の限定された水溶解度のためにＳ．Ｃ．注射部位からの吸収が遅いことを反映している。] 図５
[0120] これらのデータは、マウスの肝臓の血流の推定値（５．４Ｌ／ｈ／ｋｇ）(７４)と合わせると、ジインドール１３は、０．７５を超える高い肝抽出で肝臓にて大幅に代謝されたことを示唆している。ジインドール１３は、総体液（すなわち、０．６Ｌ／ｋｇ）より約１０倍多い分布体積で広く分布した。マウスの代謝産物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析は、ジインドール１３はその後の硫酸化と共に幅広い酸化的代謝を受けることを示した（データは示さず）。最後に、これらのデータは、肝チトクロームＰ４５０を介したミクロソームの酸化からジインドール１３を保護するための芳香族環のハロゲン化のような構造的修飾が有益であり得ることを示唆している。表３に薬物動態のパラメータを提供する。]
[0121] ]
[0122] ＰＣ−３を異種移植したＢａｌｂ／ｃマウスにおける化合物１３の抗腫瘍活性
ＰＣ−３腫瘍細胞（２×１０６個）を生理食塩水に浮遊させ、レシピエントマウス（ｎ＝１５）の両脇腹に皮下注射した。腫瘍のサイズを２日に１回測定し、Ｖ＝π／６＊（長さ）×（幅）２（７５）として算出した。腫瘍がおよそ１７５ｍｍ３の体積に達したら、ジインドール１３（５０、１００、又は１５０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）又はパクリタキセル（体重低下により認められた毒性によって、１５ｍｇ／ｋｇ／ｄを４日間のみ）によって日々の処理（５日間投与２日間休薬）を開始した。試験の残りについて、腫瘍の成長と体重を２日に１回モニターした。パクリタキセル（タキソール）は、１５ｍｇ／ｋｇ／ｄの用量でＰＣ−３異種移植片の成長を強く抑えたが、体重の有意な低下も誘発した（図６）。ジインドール１３も用量依存的に腫瘍の成長を抑え、１５０ｍｇ／ｋｇ／ｄの用量は、パクリタキセルの抗腫瘍有効性及び毒性に近似した。] 図６
[0123] 実施例６
ａｂｃトランスポータを過剰発現する細胞における試験管内での化学療法剤感受性試験及びアポトーシス試験
これらの試験では、親細胞株とその安定的に形質移入された細胞株のペア又は選択的に維持された細胞株のペアを用いる。Ｐ−糖タンパク質試験については、Ｋ５６２白血病細胞株（親株）とドキソルビシン耐性のＫ５６２／Ｄｏｘ細胞株を用いる。ＭＲＰｘ試験については、卵巣癌２００８細胞株（親株）とＭＲＰ１、ＭＲＰ２及びＭＲＰ３を過剰発現する安定的に形質移入したその変異体（２００８ＭＲＰ１）、（２００８ＭＲＰ２）及び（２００８ＭＲＰ３）を使用する。これらの細胞は、オランダ癌研究所のアントン・バーンズ教授から提供された。ＢＣＲＰ試験については、ＨＥＫ−２９３（親株）と、ＢＣＲＰを過剰発現し、安定的に形質移入したその変異体（ＡＢＣＧ２）を使用し、デュキシン・サン博士を介してＮＩＨのスーザン・ベイト博士から入手する。これらのトランスポータのその活性に影響を及ぼす能力の最初の評価として各有効化合物の化学療法剤感受性、すなわち、ＩＣ５０値をこれらの細胞株のペアで測定する。]
[0124] 様々な播種密度（ウェル当たり１×１０３〜１×１０６個）及びインキュベーション時間を用いて各細胞株についてパイロット試験を行って成長条件を最適化する。１０倍連続希釈（０．０１〜１００μＭ）を用いる。必要に応じて、さらに小さい範囲の各薬剤のＩＣ５０付近の適当な濃度を採用する。Ｋ５６２アッセイのような浮遊培養については、ＳＲＢ又はＭＴＴを用いて各ウェル内の細胞数を測定し、非線形回帰（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（商標））を用いてＩＣ５０値を決定する。ＡＢＣを発現している細胞株におけるＩＣ５０／親細胞株のＩＣ５０の比として輸送の程度を推定する。既知の基質、たとえば、カルセインとミトキサントロンとパクリタキセル、及び阻害剤、たとえば、ベラパミルとスルフィンピラゾンとフミトレモルギンＣを採用して、発現している細胞株の生存率を確保し、特定のトランスポータの耐性への寄与を確認する。化合物間のＩＣ５０値の統計学的比較は、５％の有意水準でＡＮＯＶＡを用いて行う。]
[0125] 或いは、Ｐ−糖タンパク質が介在するステロイド性グルココルチコイドの輸送についての構造活性相関を調べる以前報告されたもの（１３）に似た方法を用いて、ＨＰＬＣ又はＬＣ／ＭＳ／ＭＳを用いてこれらの細胞株における薬剤輸送を実施して類似体濃度を定量することができる。この例では、比較のために有効な透過性係数及び輸送効率（Ｔｅｆｆ）値を使用する。]
[0126] 実施例７
既知のチューブリン結合部位についての競合
バーカー（Bacher）ら（９５〜９６）によって記載されたものに類似するスピンカラム結合アッセイを用いて、ジインドールがパクリタキセル、コルヒチン又はビンクリスチンと同じ結合部位について競合するかどうかを判定する。様々な濃度（０〜２０μＭに及ぶ）の非標識ジインドール１３の存在下又は非存在下で放射性標識したパクリタキセル、コルヒチン又はビンクリスチンと共に脱重合化したチューブリンを３７℃にて１時間インキュベートする。次いでインキュベートしたものをサイズ排除セファデックスＧ２５カラムに負荷し、２００×ｇで１分間遠心し、通過したものの放射活性をシンチレーションカウンタで定量する。カラムは遊離の放射性リガンドを保持するが、結合した化合物は保持しない。従って、ジインドール１３の存在下で通過したものにおいて放射活性が低下するということは競合結合を示す。非標識のパクリタキセル、コルヒチン及びビンクリスチンを陽性対照として用いる。]
[0127] 物質収支の目的で各実験の総放射活性をモニターする。チューブリンの重合を強力に阻害する本明細書で記載される複素環類似体又は構造的に修飾された類似体を用いる。競合が認められるのであれば、各薬剤についての各阻害剤の平衡解離定数（Ｋｉ）を以下の方程式：Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／Ｋｄ）（式中、ＩＣ５０は３Ｈ−放射性リガンドの結合を５０％阻害する我々のリガンドの濃度であり、［Ｌ］は加えた３Ｈ−放射性リガンドの濃度であり、Ｋｄは放射性リガンド、たとえば、３Ｈ−ビンクリスチンの平衡解離定数である）によって算出する。実験は３つ組で実施する。]
[0128] そのほかのチューブリンと相互作用する薬剤について同定された独特の結合部位に基づいて（９５〜９６）、３Ｈ−標識したパクリタキセル、コルヒチン又はビンクリスチンの結合がジインドール１３又はそのほかの化合物によって阻害されることは期待されていない。しかしながら、もし阻害するのであれば、これは、チューブリンの相互作用に関する構造活性相関を調べるための；すなわち、放射性リガンドの競合結合試験のための別の薬理学的ツールを提供することになる。]
[0129] 実施例８
試験管内での肝代謝
代謝産物を同定するために、ＮＡＤＰＨ生成系、ウリジンジホスホグルクロン酸（ＵＤＰＧＡ）及びそのほかの必要な補因子を伴ったマウスの肝臓Ｓ９分画（高タンパク質濃度）と共に、ジインドール１３及びそのほかの当該化合物を３７℃にて２時間インキュベートする。すべてでなくとも出来るだけ多くの代謝産物を同定することを期待して、親薬剤の代謝産物への最大の変換を確保するために高いタンパク質濃度と長いインキュベーション時間を選択する。インキュベーションに続いてアセトニトリル（ｖ：ｖ／１：１）によってタンパク質を沈殿させる。上清中の残りの有機相を窒素のもとで蒸発させ、得られる濃縮試料をＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析に使用する。]
[0130] 陽イオン及び／又は陰イオンエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ−）質量分析（カリフォルニア州、サンノゼのＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱ ＤＥＣＡ ＸＰマックスイオントラップ質量分析装置）を用いて試料を解析する。各親化合物によるパイロット実験にて、代謝産物のＬＣ分離についての勾配溶出の条件及び質量分析のための最適化条件（たとえば、キャピラリー温度、電圧、シース及び補助気体流など）を決定する。データの獲得はＸｃａｌｉｂｕｒソフトウエア（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ）によって制御し、代謝物ＩＤ及びマスフロンティアソフトウエアを用いて代謝産物を同定する。合成の基準品を合成し、代謝産物の構造を確認することができる独立したＮＭＲ研究を実施する。]
[0131] 種々のタンパク質（すなわち、ミクロソーム及びＳ９）濃度、薬剤濃度及びインキュベーション時間を用いた予備試験を行って線形の代謝産物生成及び動態解析のための適当な条件を同定する。反応はすべてＮＡＤＰＨ及び／又はＵＤＰＧＡ（Ｓ９分画）の存在下３７℃で実施する。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ）を用いた非線形回帰及びＳ字状Ｅｍａｘモデルによって、親薬剤の消失を説明する動態パラメータＫｍ及びＶｍａｘを決定する。ＨＰＬＣ又はＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析用の内部標準を含有する氷冷アセトニトリル（ｖ：ｖ／１：１）を添加することによって反応を停止する。反応混合物に存在するタンパク質を遠心によって沈殿させ、上清を適当な移動相で希釈するか、又はそのままＨＰＬＣ若しくはＬＣ／ＭＳ／ＭＳの解析に使用する。ＨＰＬＣ及びＬＣ／ＭＳ／ＭＳの方法を開発し、各生体マトリクスにおける各検体について検証し、定量に使用する。]
[0132] 実施例９
急性及び亜慢性の毒性（用量設定）試験
オスＩＣＲマウス（タコニックラボラトリーズ）における最大耐性用量（ＭＴＤ）及び１０％のマウスに対する致死用量（ＬＤ１０）を決定する。当該類似体をその溶解度付近の濃度でＰＥＧ３００又は生理食塩水に溶解し、１：５の比率で連続希釈して様々な投与用溶液を提供する。急性ＭＴＤ（ｍｇ／ｋｇ）に相当する、２４時間以内に死亡させない又は明らかな毒性を生じない用量が見つかるまで低い静脈内用量を漸次、動物に与える。急性ＭＴＤを確定するには薬剤当たり１０匹未満のマウスを必要とする。]
[0133] 生体内での抗腫瘍薬効試験中での動物の死亡が腫瘍の負担によるものであって薬剤処理によるものではないことを裏付けるために、類似体の亜慢性毒性を決定する。マウスを１０匹の群に分ける。第１群には急性ＭＴＤを与え、第２群には１／１０のＭＴＤ、第３群には１／２５のＭＴＤ、第４群には１／５０のＭＴＤ、第５群には１／１００のＭＴＤを与える。５日間投与２日間休薬の投薬計画を用いて２週間連続、投与量を尾静脈を介して静脈内に投与する（経口投与又は皮下注射の後での様々な吸収に関連する懸念を回避するために）。薬剤処理に続いてさらに最高３１日間マウスの生き残りをモニターする。生き残った動物の比率を用量（ｍｇ／ｋｇ）に対してプロットし、非線形回帰によってＬＤ１０を決定する。パクリタキセル及びビンブラスチンによる試験も実施する。]
[0134] 実施例１０
Ｋ５６２及びＫ５６２／Ｄｏｘの腫瘍異種移植に対する生体内での薬効
Ｋ５６２及びＫ５６２／Ｄｏｘの腫瘍細胞（フランス、パリのＪ．Ｐ．マリー博士より惜しみなく提供された）を別々にマトリゲル（ベクトン・ディッキンソン）と混合し、それぞれ、８週齢のオスヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスの左脇腹及び右脇腹に皮下注射する（１×１０７個の細胞を含有する細胞とマトリゲルの懸濁液０．２ｍＬ）。これによって、群を比較する際に生じる可能性がある体重、薬物動態、毒性などの差異による変動を減らして、同一動物にて薬剤処理に対する双方の腫瘍の応答を同時に測定することができる。関連すると思われるのであれば、そのほかの関連するＡＢＣトランスポータを過剰発現する細胞に由来する腫瘍異種移植を用いた試験も含めてもよい。]
[0135] およそ３週間腫瘍を成長させ、腫瘍の体積を２日に１回測定する、Ｖ＝π／６＊（長さ）×（幅）２（７５）。腫瘍の体積が１５０ｍｍ３に達したら動物を無作為に処理群に分ける（群当たりｎ＝１０）。適当な統計的検出力（０．８〜０．９）を確保して、対照群と薬剤処理群の間で腫瘍の体積に２５％の差異を同定するには処理群当たり１０匹の動物を必要とする。各化合物について５つの処理群を使用する。第１群：未処理の対照、第２群：ビヒクル処理の対照、第３〜５群：０．０１×ＬＤ１０、０．１×ＬＤ１０及びＬＤ１０の毎日の静脈内投与量にて当該類似体で処理する。従って、各類似体の抗腫瘍薬効は、Ｋ５６２及びＫ５６２／Ｄｏｘ異種移植の担癌ヌードマウス５０匹で調べる。移植後４５日間までの実験の間、２日に１回腫瘍の体積を測定することによって、又は腫瘍が動物の体重の≧１０％の体積に達した際に、抗腫瘍効果を評価する。ＡＮＯＶＡ（α＝０．０５）を用いて、腫瘍成長の遅延、腫瘍成長の速度、平均腫瘍体積及び最終腫瘍体積を群間で比較する。]
[0136] 実施例１１
動物全体での薬物動態
これらの試験にオスＩＣＲマウスを使用する。薬剤を３０匹の動物に静脈内投与する。投与後、種々の時間（５回の半減期まで）に３匹のマウスを麻酔し、心臓穿刺又は眼窩静脈叢を介して血液試料（各約５００〜１０００μＬ）を得る。ＬＣ／ＭＳ法（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＭＡＸ三連四重極質量分析計及びＬＣＱ Ｄｅｃａ ＸＰ Ｍａｘイオントラップ質量分析計は、ダルトン博士の研究室２４１号室で利用可能である）を用いて血漿の薬剤濃度を測定する。非線形最小二乗回帰を用いて血漿の薬剤濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、分配の体積、クリアランス及び半減期を各群について計算し、スチューデントの両側ｔ検定及び多重線形回帰解析を用いて差異を評価する。腫瘍をこれらの時点で摘出し、均質化及び抽出の後、親細胞（Ｋ５６２）及びＰ−糖タンパク質を発現する細胞（Ｋ５６２−Ｄｏｘ）を含有する腫瘍における薬剤濃度を決定することを除いて、類似するアプローチを用いて、ジインドール１３及びそのほかの類似体の薬物動態上の利点を担癌オスヌード（ｎｕ／ｎｕ）マウスで評価する。ＡＮＯＶＡを用いて最大濃度（Ｃｍａｘ）及びＡＵＣ腫瘍値を比較する。]
実施例

[0137] 本発明の範囲から逸脱することなく種々の変更が行われてもよく、それが明細書で記載されるものに限定されるとみなされるべきではないことは当業者に明白であろう。
以下の参考文献が本明細書で引用される。
1. Ketcha et al. J. Org. Chem. 1989, 54: 4350-4356.
2. Sakmoto et al. J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1996, 1:1927-1934.
3. Mahboobi et al. J. Med. Chem. 2002, 45(5):1002-1018.
4. Mahboobi et al. J. Org. Chem. 1999, 64:8130-8137.
5. Hashizume et al. Chem Pharm Bull (Tokyo), 1994, 42(10):2097-2107.
6. Elofson et al. J. Org. Chem. 1964, 29.
7. Paquer, D. and Vialle, J. Bulletin de la Societe Chimique de France, 1969, 10:3595-3601.
8. Li et al. Chemistry, 2000, 6(9):1531-1536.
9. Maugard et al. Phytochemistry, 2001, 58(6):897-904.
10. Venepalli et al. J Med Chem, 1992, 32(2):374-378.
11. Rubinstein et al. J Natl Cancer Inst, 1990, 82(13):1113-1118.
12. Rose, W.C. Taxol: Science and Applications, M. Suffness, Editor. 1995,CRCPress: Boca Raton,FL. p. 209-235.
13. Yates et al. Pharm Res, 2003, 20(11):1794-1803.]

权利要求:

請求項1
以下の構造を有する化合物及び薬理学上許容可能なその塩又は水和物（式中、Ｒ１は、Ｈ、ハライド、ＣＦ３、ＮＯ２、ＯＨ、−ＯＣＨ３又はＣＮアルキル、アルケニル、Ｏ−アルキル及びＯ−アリールであり、ｎは０、１、２、３、又は４であり；Ｒ２は、Ｈ又は−ＳＯ２Ｐｈであり；Ｒ３は、Ｒ４によってＣ３又はＣ５にて置換されたフェニル；Ｒ８Ｒ９；Ｒ１２Ｒ１３；２−、３−又は６−インドリルによってＣ１、Ｃ２又はＣ３にて置換された２−、３−又は６−インドリル（インドリル部分のいずれかは独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換される）；又は、Ｃ５、Ｃ６又はＣ７にて２−、３−又は６−インドリルによって置換されたナフチル又は置換されないナフチル（インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換される）であり；Ｒ４は、Ｒ５、Ｃ１〜３アルキレン−Ｒ５、Ｃ（Ｏ）Ｒ６、ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（Ｒ７）−Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ７−Ｒ６、−Ｏ−Ｃ（Ｒ７）−Ｒ６、Ｒ８、Ｒ７Ｒ８−（２−、３−若しくは６−インドリル）、Ｒ８−（２−、３−若しくは６−インドリル）（前記インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換される）、Ｒ８Ｒ９又はＲ１２Ｒ１３であり；Ｒ５は、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ１−３アルキル、Ｎ＝Ｎ＝Ｎ、ＣＮ又はＯＲ６であり；Ｒ６は、Ｈ、Ｃ１−３アルキル、又は、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって独立して置換された５員環若しくは６員環であり；Ｒ７は、Ｏ、Ｓ又はＮＨであり；Ｒ８は、−ＣＨ２、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｃ＝ＣＨ２、Ｃ＝ＮＯＨ、Ｃ＝Ｎ（ＮＨ２）であり；Ｒ９は、Ｃ３にてＲ１０によって、及びＣ４とＣ５にてＲ１１によって独立して置換されたフェニル、Ｃ４にて−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３によって置換されたチアゾリル、又はＣ５、Ｃ６若しくはＣ７にて２−、３−若しくは６−インドリルによって置換されたナフチル又は置換されないナフチルであり、前記インドリル部分は独立してＣ１にてＲ２によって、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって、又はそれらの組み合わせによって置換され；Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、−ＯＣＨ３、フェニル、ナフチルであり、又はＣ４のＲ１１とジオキソリル環を形成し；Ｒ１１は、Ｈ、ＯＨ又は−ＯＣＨ３であり；Ｒ１２は、ピロリル、フラニル、チエニル又はシクロペンタジエニルであり；Ｒ１３は、それぞれ独立してＣ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５若しくはＣ６にてＲ１によって置換された−Ｃ（Ｏ）−２−、３−若しくは６−インドリル、−Ｃ（Ｏ）−イミダゾール、−Ｃ（Ｏ）−チアゾール、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−イソオキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−ベンズオキサゾール、−Ｃ（Ｏ）−ピロール、−Ｃ（Ｏ）−フラン、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾリン、−Ｃ（Ｏ）−オキサゾリジン、−Ｃ（Ｏ）−オキサジアゾール、−Ｃ（Ｏ）−ナフチル又は−Ｃ（Ｏ）−フェニルである）。
請求項2
Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであり、Ｒ４がＲ８を有する、請求項１に記載の化合物。
請求項3
以下から選択される構造を有する、請求項２に記載の化合物。
請求項4
Ｒ１がＨ又はＦであり、Ｒ３がＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであり、Ｒ４がＲ８(２−、３−、又は６−インドリル）である、請求項１に記載の化合物。
請求項5
以下から選択される構造を有する、請求項４に記載の化合物。
請求項6
Ｒ３がＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであり、Ｒ４がＲ７Ｒ８(２−、３−、又は６−インドリル）である、請求項１に記載の化合物。
請求項7
以下から選択される構造を有する、請求項６に記載の化合物。
請求項8
Ｒ３がＣ３又はＣ５にてＲ４によって置換されたフェニルであり、Ｒ４がＲ８Ｒ９である請求項１に記載の化合物。
請求項9
以下から選択される構造を有する、請求項８に記載の化合物。
請求項10
以下の構造を有する、請求項８に記載の化合物。
請求項11
Ｒ３が２−、３−、又は６−インドリルである、請求項１に記載の化合物。
請求項12
以下から選択される構造を有する、請求項１１に記載の化合物。
請求項13
Ｒ３がナフチルである請求項１に記載の化合物。
請求項14
以下から選択される構造を有する請求項１３に記載の化合物。
請求項15
Ｒ３がＲ８Ｒ９である請求項１に記載の化合物。
請求項16
以下（式中、Ｙは独立してＨ、ＯＨ、ＯＣＨ３から選択される）から選択される構造を有する、請求項１５に記載の化合物。
請求項17
Ｒ３がＲ１２Ｒ１３である請求項１に記載の化合物。
請求項18
以下から選択される構造を有する（式中、Ｚは独立してＳ、Ｏ、ＮＨ及びＣＨ２から選択される）、請求項１７に記載の化合物。
請求項19
細胞増殖性疾患に関連する細胞におけるチューブリンの重合を阻害する方法であって、薬理学上有効量の請求項１の化合物と前記細胞とを接触させることを含む方法。
請求項20
前記細胞増殖性疾患が癌である、請求項１９に記載の方法。
請求項21
前記癌が、前立腺癌、結腸癌又は乳癌である、請求項２０に記載の方法。